污染是指在培养过程中，培养基或培养材料上滋生细菌、真菌等微生物，使培养材料不能正常生长导致培养失败的现象。

1.1 造成污染的因素

（1）培养基及各种使用器具消毒不彻底

（2）外植体灭菌不彻底，有菌残存在细胞组织中

（3）操作时人为因素带入

（4）环境不清洁

（5）超净工作区域污染

1.2污染来源

（1）真菌：

室内真菌种类主要有芽枝孢霉属、曲霉属、铰链孢霉属、镰刀霉属、青霉属等。春、夏季，尤其是南方的梅雨时节，温暖潮湿，非常适合真菌生长。如果长期使用空调而不注意通风，可引起室内真菌污染。室内有空调比没有空调情况下曲霉菌落数多4倍。

（2）细菌

细菌是无孔不入的微生物，为避免细菌的侵袭，科学家曾尝试用抗微生物材料生产各种用品，但效果不十分理想，因为这些材料虽然能杀死细菌，却充满了化学物质。

（3）组织培养过程中的污染源

屋内潮湿，菌类繁衍较多、物品带菌多、屋内不干净、屋内有带菌组培苗、接种方法不正确。

1.3 污染传播途径

（1）户外风传播

菌类细小如尘，随风飘散，由上下落，见湿就长。

（2）涡流传播

超净工作台上，摆放物品太多，当无菌风吹过时，就会在物品周围形成涡

流群，菌类就会在涡流群中停留，从而降低净化效果，增加污染机会。

（3）接种传播

脏手每只带有细菌4万-40万，干净的手，指甲盖大小也有3200多个细菌。指甲缝可以窝藏30多种细菌。如果手上带菌较多，在操作过程中，就难免有菌落入培养基或植物材料上，而导致污染。另外，不正确操作也会增加污染机率，掀盖生硬，灭菌不够，操作过慢等。接种过程应该轻开盖，火灭慢，操作快。

1.4 预防污染的措施

（1）组培过程中使用的培养基以及接种过程中使用所有器具必须采用适当方法严格灭菌。

（2）按照要求选择外植体，采取措施尽量减少外植体上的带菌量，以利于材料灭菌。如对枝条进行预培养，以其新抽枝作为外植体可大大降低污染。

（3）要注意保持接种和培养环境的清洁，定期进行熏蒸或喷雾消毒。保持

室内空气流通可以减少室内真菌数量；保持室内空气干燥，如使用空调“除湿”

功能，也可减少真菌生长繁殖。

（4）进行无菌操作时要严格按照无菌操作规程进行，避免人为因素造成污染。

（5）污染物品和污染培养基必须经高压灭菌，彻底杀死各种微生物后再进行清洗。

1.5 污染原因判断及污染苗抢救

（1）若污染菌类是零星分散在培养基中，则可确定是人为引起的污染，比如培养基灭菌不彻底；超净工作台长时间不换滤网，致使净化能力降低；接种用具灭菌不彻底；操作不正确，动作生硬缓慢，开瓶时间太久，接种台摆放物品杂乱，操作中心在人体范围之内；接种室长期不灭菌，菌类太多。

（2）若污染菌类是从材料周围长起，则可证明是植物材料带菌引起。可能是接种用具灭菌不彻底，接种时材料被污染；或者是未及时发现污染苗，接种过程交叉感染；

（3）若是外植体，菌类从材料培养基以上部分长起，而不是从培养基先长

起，且发生在5天以后，则说明是材料带的内生菌。若从培养基以下开始长菌，发生时间较早，且有从里向外的趋势，则说明是切口引起的污染；

抢救措施：

（1）真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉，即使仅形成菌丝，菌丝能够达到材料内部，因此，真菌污染是灭绝性的。但若是细菌污染，由于细菌繁殖是靠芽孢，细菌不会弥散整个空间，因此只要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可以用。

（2）用抗生素等杀菌药剂的处理，虽有不少报道，但至今还未发现那种抗生素能够对各种菌都有效，并且常常也会影响植物材料的正常生长分化。另一些药剂，虽杀菌效果好，但往往容易引起盐害，也无法利用。

组培常见问题之污染及其预防措施，谢谢阅读。