白芷组织培养再生植株的研究
2013-12-24亚龙组培

取2-3年生白芷植株的幼叶为外植体,以MS为基本培养基,附加水解酪蛋白0.5-1毫克/升,按需要加入2,4-D和BA。幼叶经0.1%升汞液表面灭菌、无菌水浸洗后分别将叶片与叶柄切块接种于含有不同浓度组合的2,4-D与BA的MS培养基上进行培养。培养温度为25℃-28℃,光照用30W荧光灯,培养材料距灯管20-40厘米,每天照光10-12小时。

实验结果表明:白芷的叶柄为松软的海绵状组织,其外植体在含有不同激素的MS培养基上长期培养,未见启动;幼叶叶片切块在MS附加2,4-D 0.5-2 BA0.2毫克/升培养基上暗处培养70多天,获得可转接的愈伤组织,将其转接到MS附加2,4-D0.01-0.1毫克/升 BA0.01-0.1毫克/升培养基上后,在光照条件下分化出珠状结构的芽,其大小如豌豆,形似荸荠。进而幼叶2-3片破鞘状体而出,基部长出粗状的根,形成了完整的小植物;若转接到低浓度的2,4-D与BA的MS培养基上,仍在暗处培养,则形成大量团状愈伤组织,并从其局部分化出胚状体,在光照条件下,胚状体经不同发育时期形成再生植株。再生植株的移栽成活率可达100%,植株生长良好,能正常开花结实。对川白芷[A.dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan]进行了再生植株的研究。经多组实验研究,最终选择了叶轴为最佳外植体:取2年生川白芷生长健壮的植株,割取其叶轴部分,清水洗净,用0.1%的升汞液表面消毒12分钟,无菌水漂洗5次,在无菌条件下切割接种在MS附加BA1、NAA0.5的培养基上,培养温度为25±2℃,光照每天8小时,光照强度1500LX。培养25天后,出愈率达到100%,且愈伤组织质地较致密,生长速度适中。继续培养至60天后,芽分化率达98%,且绿色丛生芽量多,表现出生机旺盛。当试管苗长至约2.5-3厘米左右高时,从基部切下,接种在1/2MS NAA1、蔗糖减至1.5%的生根培养基上,约10天以后,从切口处开始产生白色突起,20天后多数刷把状粗状的根产生了,平均每株产根10-15条,生根率达95%以上;待根长至1.5-2厘米左右时,直接移出瓶外,洗净其上的培养基,移入小钵中,先期罩一薄膜袋保湿,约一周后拿掉薄膜袋,每天浇一次水,二周后,移入田间,使其在自然条件下生长,移栽成活率100%。
在本实验研究过程中还发现,川白芷组织培养中,加入2,4-D的效果不如NAA与BA结合使用的效果好;叶轴、叶柄为愈伤化明显的外植体,而叶片与子叶启动无效;光照下培养25天,愈伤化明显,50天后便可获得可转接的愈伤组织。而在白芷经胚状体途径再生植株的实验中,愈伤组织的生长有赖于2.4-D的加入,且认为叶片为理想的外植体,而叶柄则长期未见启动;要获得可转接的愈伤组织需暗培养70多天。由此可见,不同种类的白芷在选择外植体和形成愈伤组织的培养条件上是不相同的。

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